Biolomolo 2 termin

Biologia molekularna Test 1 2 termin
1. Metylacja DNA
• chemiczna modyfikacja DNA polegająca na przyłączaniu grup metylowych.
• przeprowadzana przez enzymy metylotransferazy DNA
• Funkcja: powoduje długotrwałe wyciszanie regionów DNA (możliwe jest wyciszenie
całego chromosomu)
• częste dziedziczenie (po podziale) przez komórki potomne
• metylowane są tylko cytozyny
• metylacja zachowawcza – po replikacji DNA odpowiada za przyłączenie grup
metylowych do nowo zsyntetyzowanej nici DNA w miejscach komplementarnych do
miejsc metylowych w nici rodzicielskiej. Dzięki niej dwie potomne cząsteczki DNA są
metylowane w taki sam sposób jak cząsteczka rodzicielska
Metylotransferaza 1 odpowiada za metylację zachowawczą.
• metylacja de novo – grupy metylowe są przyłączane w całkowicie nowych miejscach, a
więc zmienia się wzór metylacji konkretnych fragmentów genomu. Metylotransferaza
3a i 3b odpowiadają za metylację de novo.
2. Polimerazy DNA u prokariota
Polimeraza Ilość podjednoste Aktywność
endonukleazow
Funkcja
DNA I 1 3'à5'
5'à3'
replikuje i naprawia
DNA
DNA II powyżej 10 3’à5’ główny enzymem
replikacyjny
3. Polimeraza DNA u eukariota
Polimeraza Ilość
podjednostek
Aktywność
endonukleazow
Funkcja
α 4 synteza starterów
β naprawa DNA
γ 2 3’à5’ syntezuje
mitochondrialnego DNA
δ 2 lub 3 3’à5’ główny enzym
replikacyjny à synteza
nici wiodącej
ε 1 3’à5’ synteza nici opóźnionej
4. Polimeraza RNA
• Polimeraza RNA I à transkrybuje geny kodujące rRNA (28S; 5,8S; 18S)
• Polimeraza RNA II à transkrybuje geny kodujące mRNA, snRNA i mikroRNA
• Polimeraza RNA III à transkybuje geny kodujące tRNA i 5S rRNA (i chyba snoRNA)
5. Aminokwasy – wzór ogólny + podział
Biologia molekularna Test 1 2 termin
6. Klasyczne metody cytogenetyki
Technika Prążkowanie Przebieg Barwnik Barwienie
GTG G proteoliza à
barwienie
Giemzy ciemne prążki à A-T
jasne prążki à G-C
RHG
RBA
RBG
R denaturacja
cieplna à
barwienie
Giemzy ciemne prążki àG-C
jasne prążki à A-T
QFQ Q barwienie
fluorescencyjne
chinakrytyna ciemne prążki à A-T
jasne prążki à G-C
CBG C denaturacja
Ba(OH)2 w
podwyższonej
temperaturze à
barwienie
Giemzy ciemne prążki à
kontytutywna
heterohromatyna
centromerowa i
przecentromerowa
Ag-NOR NOR wysycenie
regionów
jąderkowych
przez azotan
srebra
azotan srebra Prążki NOR
zlokalizowane w
chromosomach par 13-15
i 21-22
7. CYTOGENETYKA MOLEKULARNA
• HYBRYDYZACJA IN SITU - dodawanie sondy do rozproszonych na powierzchni szkiełka
chromosomów metafazowych à porównanie ziarnistości obrazu z histologiczną
identyfikacją chromosomów. Metoda ta pozwala na umiejscowienie genu w określonym
prążku lub regionie chromosomu.
• HYBRYDYZACJA FISH –
à przebieg jak w hybrydyzacji in situ
à sonda fluorescencyjna
à pozwala na umiejscowienie genu w określonym prążku lub regionie chromosomu
à pozwala na badanie jąder komórkowych w stadium metafazy i interfazy
Biologia molekularna Test 1 2 termin
à stosowana w wykrywaniu konkretnych mutacji i miejsc pęknięć
à odmiany: FIBER-FISH, M-FISH i SY-FISH
à FIBER-FISH - przed hybrydyzacją przeprowadza się rozciąganie genomowego DNA
izolowanego z jąder interfazowych
à M-FISH (wielobarwne kariotypowanie FISH) - polega na zastosowaniu kilku sond
znakowanych różnymi fluorochromami, które po wzbudzeniu dają różnobarwny
obraz
àSKY-FISH (analiza widmoma kariotypu) - polega na wybarwianiu określonych
regionów chromosomu przy użyciu komplementarnych sond molekularnych,
wyznakowanych różnymi fluorochromami. W rezultacie otrzymujemy wielobarwny
obraz kariotypu, gdzie każda para chromosomów ma inny kolor
• PORÓWNAWCZA HYBRYDYZACJA GENOMOWA CGH
à wykrywa obecność dodatkowego lub brak materiału genetycznego
à umożliwia analizę wszystkich chromosomów bez obowiązku prowadzenia hodowli
komórek pacjenta
à stosowana w diagnostycznej niektórych typów nowotworów
à pozwala na identyfikację zmian (delecji, duplikacji i amplifikacji) w chromosomach
à polega na podwójnej hybrydyzacji z sondami pochodzącymi ze zdrowych i
nowotworowych komórek
• CYTOMERIA PRZEPŁYWOWA
à metoda wydzielania pojedynczych chromosomów.
à polega na otarciu komórki w metafazie à barwienie barwnikiem fluorescencyjnym
(większe chromosomy dają mocniejszy sygnał) à przepuszczenie przez detektor kropli
rozcieńczonego preparatu, który segreguje chromosomu
8. Modyfikacje histonów
• Acetylacja histonów
à polega na przyłączaniu grupy acetylowej do lizyn w N-końcowym fragmencie
każdego histonu rdzeniowego, co wywołuje zmianę struktury chromatyny (powoduje jej
rozluźnienie)
à zmniejsza powinowactwo histonów do DNA
à prawdopodobnie osłabia oddziaływania między poszczególnymi nukleosomami,
destabilizując strukturę włókna chromatynowego 30nm.
• Deacetylacja histonów
à usuwanie grup acetylowych z ogonów histonowych
à znoszenie efekt aktywacji transkrypcji przez a...