MIKROBIOLOGIA- ĆWICZENIA I 01.10.2012
PRELEKCJA I: BADANIE MIKROBIOLOGICZNE
- u osób chorych
- u ozdrowieńców
- grupy ryzyka (osoby narażone)
- bezobj...
3 downloads
0 Views
MIKROBIOLOGIA- ĆWICZENIA I 01.10.2012
PRELEKCJA I: BADANIE MIKROBIOLOGICZNE
- u osób chorych
- u ozdrowieńców
- grupy ryzyka (osoby narażone)
- bezobjawowi nosiciele
- pracownicy medyczni
Najlepiej badać w czasie:
- fazy ostrej
- fazy rekonwalescencji
SPOSOBY POSZUKIWANIA DROBNOUSTROJÓW: Hodowla na podłożach sztucznych (wyjątek-nie rosną: krętek blady, prątek trądu) Preparat mikroskopowy Badania molekularne (poszukiwanie kwasów nukleinowych w drobnoustrojach) Testy lateksowe Poszukiwanie swoistych przeciwciał -> badanie serologiczne (w fazie rekonwalescencji, w surowicy) Testy skórne (w wyjątkowych przypadkach) -> gruźlica, brucenoza, trąd Poszukiwanie toksyn (zatrucie jadem kiełbasianym, gronkowcem)
CEL BADAŃ: Wykrycie Identyfikacja Wykonanie badania lekowrażliwości (antybiogram(
WARUNKI HODOWLI SZTUCZNEJ: Temperatura: 37 st. Celsjusza Czas: min. 1 doba, czasem kilka dni (beztlenowce) albo tygodni (prątki gruźlicy- do 6 tyg.) Tlenowe, mikroaerofilne (podwyższone stężenie CO2 ->Helicobacterpylori)
PODŁOŻA: Płynne- bulion BHI (mózgowo-sercowy) Stałe- agar zwykły, agar z krwią końską (określa się typy witaminy hemolizy): Hemoliza typu β- całkowita, u paciorkowca ropotwórczego Hemoliza typu α- częściowa, strefa zazielenienia (no. Paciorkowce jamy ustnej, dwoinka zapalenia płuc) Hemoliza typu ¥- bram hemolizy (paciorkowce kałowe) Podłoża wybiórczo-różnicujące:
- podłoże Chapmana (dla gronkowców), zawiera mannitol (rozkład mannitolu-kolonie żółte [u gronkowca złocistego], brak rozkładu mannitolu- kolonie białe [pozostałe gronkowce])
- podłoże MacConkey’a- dla pałeczek G(-). Zawiera laktozę (gdy następuje fermentacja lub rozkład laktozy- kolonie są czerwono różowe {np. Escherichia coli], gdy brak fermentacji- kolonie są przezroczyste [Salomenlla, Shigella]). Podłoża specjalne (posiadają unikalny skład)
- pałeczki krztuśca
- pałeczki Legionelli
- prątki gruźlicy
- przecinkowce
BADANIE MIKROSKOPOWE
2 warianty: Z materiału od pacjenta- obowiązkowo jeśli jest to materiał w warunkach zdrowia jałowy.
Przykłady:
- płyn mózgowo-rdzeniowy
- płyny ustrojowe (krew- po namnożeniu w specjalnych butelkach z podłożem płynnym)
- wymazy z ran
- zmiany skórne
- materiały śródoperacyjne
- punktaty z ropni
- wycinki tkanek
- materiał z bronchoskopii
- z szyjki macicy
- mocz (na życzenie lekarza)
Rutynowo nie wykonuje się preparatów z kału i z gardła (zbyt bogata mikroflora)
WYJĄTKI!:
- kał – u noworodka, podejrzenie zakażenie Vibrio (przecinkowiec cholery)
- wymaz z gardła- pleśniawki u dzieci, błonica, angina Plaut-Vincenta Z kolonii wychodowanych na podłożu stałym:
- ziarenkowce, pałeczki, laseczki spiralne
METODY BARWIENIA:
- barwienie organiczne
- barwienie proste (1 barwnik) np. błękit metylenowy, fuksyna
- barwienie złożone (kilka barw):
Metoda Grama:
1. Zalać fioletem krystalicznym
2. Odczekać 3 minuty
3. Zalać wodą
4. Zalać płynem Lugola
5. Odczekać 2 minuty
6. Zalać wodą
7. Odczekać 2 minuty
8. Zalać alkoholem etylowy i acetonem (następuje odbarwienie)
9. Zalać wodą
10. Odczekać minutę
11. Zalać fuksyną i zaczekać 30 sek.
WYNIK: Gram (+) zabarwią się na fioletowo, Gram (-) zabarwią się na różowo. Metoda Neissera:
- do barwienia maczugowców Metoda Ziehl- Neelsena
- metoda kwasooporna do barwienia prątków Metoda Burri-Giusa
- do wykrywania otoczek (tusz + fuksyna wodna) Metoda barwienia przetrwalników:
- zieleń malachitowa na gorąco
MATERIAŁY DO BADANIA:
- wymazy z ucha, oka, nosa, gardła, odbytu, pochwy, szyjki macicy, wycinki tkanek, materiały śródoperacyjne, ropa, zeskrobiny, krew, mocz, kał, BAL (materiał z bronchoskopii), materiały z endoskopii, płyny ustrojowe, aseptyka.
Pobierać w warunkach aseptycznych w rękawicach do jałowych pojemników.
ĆWICZENIA, P. BAŃKA.
Gronkowiec złocisty powoduje:
- czyraki
- jęczmienia na powiece
- sepse, ropnie narządowe
- Zespół Oparzonej skóry (u dzieci)
- zakażenia ran
- zapalenia płuc u ludzi pod respiratorem
- zatrucia pokarmowe -> enterotoksyny
70% bakterii E. coli powoduje zakażenia układu moczowego!
Podłoże Sabouraudi (wybiórcze) Do hodowli grzybów ( grzybica skóry, wałów paznokciowych)
Streptococus pneumoniae- dwoinka zapalenia płuc- powoduje zapalenie płuc i zapalenie opon mózgowo- rdzeniowych.
ĆWICZENIA II- 08.10.2012
PRELEKCJA II
DIAGNOSTYKA MIKROBIOLOGICZNA- zespół czynności mający na celu identyfikację drobnoustrojów, ustalenie przynależności gatunkowej drobnoustrojów występujących w badanym materiale mikrobiologicznym.
TOK DIAGNOSTYCZNY Etapy wstępne
- analiza pochodzenia materiału
- wykonanie preparatu bezpośredniego z materiału klinicznego
- hodowla wyjściowa
2. Etapy właściwe
- izolacja czystych kultur bakterii
- morfologia makro- i mikroskopijna
- określenie cech fizjologicznych
- określenie cech biochemicznych
- określenie wrażliwości na antybiotyki
- wykonanie testów serologicznych, testów biologii molekularnej
ZASADY POBIERANIA I TRANSPORTU MATERIAŁU KLINICZNEGO DO BADAŃ MIKROSKOPIJNYCH: Skierowanie od le...