Natalia 5

For peroxidase analysis, leaf tissues from one year old acclimatized plants were macerated in 3 ml of 0,1 M phosphate buffer (pH 7) in a pre-chilled mortar and pestle. The extract was centrifudged at 18,000 x g for 15 min at 4 degrees and the supernatant was used as sample. SDS-PAGE was performed using 12% polyacrylamide gels. The gel was run by supplying a constant voltage of 200 V and 30 A at 4 degrees for 5 h and subsequently incubated in a staining solution containing benzidine (2,08 g), acetic acid (18ml), 3% hydrogen peroxide (100ml) and water (80 ml). When the blue bands appeared the reaction was arrested by immersing the gel in 300 ml of 7% acetic acid for 10 min. The number of shoots obtained with field grown explants were fewer (3 to 4) than in v itro nodal explants. BA alone at 2 mg l-1 produced a maximum of 2.9 shoots (data not shown) from axillary buds of in vivo nodal explants. Better shoot number (4.2+-0,9) was observed when 0,1 mg l-1 NAA was added to the above medium. Further enhancement of NAA caused callusing at base and suppression of differentation od lateral buds. Concentrations of BA above 2 mg l -1 resulted in vitrified shoots. On MS medium fortified with 3, 4 and 5 mg l-1 KN only two shoots differentiated on either side of the node. But highest shoot length (8 cm) was recorded at 2 mg l-z KN + 0,1 mg l-1 NAA. Though lesser number of shoots were obtained with in vivo nodal explants, the shoots were healthy and with larger leaves than in vitro derives ones.

Do analizy peroksydazy, tkanki liści mające rok zaaklimatyzowanych roślin były macerowane w 3 ml 0,1 M buforze fosforanowym (pH 7) w uprzednio schłodzonym moździerzu. Ekstrakt wirowano przy 18000 x g przez 15 minut w temperaturze 4 stopni, a supernatant był używany jako próbki. SDS-PAGE przeprowadzono przy użyciu 12% żelu poliakryloamidowego. Żel aktywowano poprzez dostarczanie stałym napięciu 200 V i 30 A w 4 ° przez 5 godzin, a następnie inkubowano w roztworze barwiącym zawierającym benzydyne (2,08 g), kwas octowy (18 ml), 3% nadtlenek wodoru (100 ml) i wodę (80 ml). Gdy pojawiły się niebieskie pasma reakcję zatrzymano przez zanurzenie żelu w 300 ml 7% kwasie octowym przez 10 min. Liczba pędów, uzyskanych z pola dorosłych eksplantów było mniej (3 i 4) od węzłowych eksplan tów in vitro. Sam BA w 2 mg l-1 wytwarza maksymalnie 2.9 pęda (dane nie przedstawione) z pączków/zarodków pachowych węzłów eksplantów in vivo. Lepszą ilość pędów (4,2+-0,9) zaobserwowano gdy dodane zostało 0,1 mg l-1 NAA do powyższych pożywek. Dalsze wzmocnienia NAA spowodowało callusing at base and suppression of differentiation of lateral buds. (nie mam pojęcia co to znaczy xd). Stężenie BA powyżej 2 mg l-1 spowodowało zeszklenie pędów. Na pożywce MS wzbogacone w 3, 4 i 5 mg l-1 KN tylko dwa pędy zróżnicowały się po obu stronach węzła. Ale najwyższa długość pęda (8 cm) została zanotowana w 2 mg lz KN + 0,1 mg l -1 NAA. Jednak mniejszą liczba pędów uzyskano z eksplantów węzłów in vivo , pędy były bardziej zdrowe i miały większe liście niż te z in vitro.